Цель исследования.

Изучить in vitro эффекты пяти прогестагенов, которые широко используются в составе препаратов для заместительной гормональной терапии (ЗГТ), на ферменты, участвующие в метаболизме эстрогенов, в раковых клетках молочной железы человека.

Дизайн исследования.

Линии гормонально-зависимых клеток рака молочной железы человека T47D, MCF-7 и MCF-7aro культивировались в среде, содержащей эстрадиол (Е2) и прогестагены. Концентрация м-РНК ферментов, участвующих в метаболизме эстрогенов, определялась с помощью двух тестов: RT-PCR или Northem-blot, а активность ферментов - с помощью субстратов с радиоактивными изотопами. Клеточная пролиферация измерялась с помощью захвата ими бромодеоксиуридина.

Были созданы модели in vitro, которые повторяли бы условия использования непрерывного комбинированного режима и циклического режима ЗГТ in vivo.

Результаты.

При использовании медроксипрогестерона ацетата (МПА) в комбинации с Е2 (в концентрации 10^-8) наблюдалась стимуляция уровней м-РНК и активация ароматаз - ферментов, активирующих эстрогены (в концентрации МПА 10^-8 М) и 17β-гидроксистероид дегидрогеназы типа 1 (17β-ГСД1) (в концентрации 10^-6 М), сульфатазы (как в концентрации 10^-8, так и в концентрации 10^-6 М) по сравнению с "чистым" Е2. Прогестерон также стимулировал ферментативную активность, однако, в меньшей степени. При использовании левоноргестре-ла (ЛНГ), норэтинодрона (НЭТ) и диеногеста (ДНГ) не отмечено стимуляции ферментов. Ни один из исследуемых прогестагенов не оказывал влияния на фермент, инактивирующий эстрогены, - 17β-гидроксистероид дегидрогеназу типа 2 и сульфотрансферазу. Однако все прогестагены (в концентрации от 10^-8 до 10^-6 М) подавляли клеточную пролиферацию под влиянием Е2. Хотя повышение ароматазной и 17β-ГСД1 активности было отмечено при изучении моделей с использованием непрерывного комбинированного режима, в случае использования циклического комбинированного режима не было отмечено значимой ферментативной стимуляции.

В настоящем исследовании МПА в комбинации с Е2 стимулировал как уровень мРНК, так и активность активирующих эстрогены ферментов - ароматаз, 17β-ГСД1 и сульфатаз и при этом почти не оказывал никакого эффекта на ферменты, инактивирующие эстрогены - 17β-ГСД2 и сульфотрансферазу. Эти результаты свидетельствуют о том, что МПА стимулирует транскрипцию генов ферментов, активирующих эстрогены, и повышает активность эстрогенов на локальном уровне. Следует отметить,что этот эффект базировался именно на индукции ферментов, а не простом взаимодействии между стероидами и участками ферментов, влияющими на катализ. Прогестерон в присутствии с Е2 имел сходные эффекты на ферменты, хотя и менее выраженные, по сравнению с МРА. В отличие от стимулирующих эффектов МРА, другие прогестагены: ЛНГ, НЭТ и ДНГ не оказывали значимого стимулирующего эффекта на ферменты, активирующие эстрогены. Возможное объяснение различий между прогестагенами - их различные структурные и функциональные характеристики.

Однако, независимо от активации ферментов, данное исследование показало, что в присутствии Е2 все тестируемые прогестагены, включая МРА и прогестерон, подавляли пролиферацию клеток рака молочной железы, вызванную воздействием эстрогенов. Интересно поразмышлять над этими очевидно противоречивыми результатами, свидетельствующими об активации ферментов и одновременном подавлении клеточной пролиферации под влиянием МРА. Хотя МРА обладает способностью ингибировать пролиферацию, из этого не обязательно следует, что он подавляет развитие рака молочных желез, поскольку условия гиперэстрогении на локальном уровне, вызванные МРА, могут способствовать увеличению риска развития рака, несмотря на подавление пролиферативных процессов. Хотя результаты данного исследования, выполненного in vitro, не могут быть экстраполированы на клинические результаты, представляется вероятным, что по сравнению с ДНГ, ЛНГ и НЭТ, МРА может способствовать созданию условий гиперэстрогенм на локальном уровне в ткани молочной же лезы при использовании в комбинации с Е в составе препаратов для ЗГТ. Таким образом МРА нельзя считать лучшим выбором для этих целей среди других прогестагенов.

Заключение.

Результаты настоящего исследования продемонстрировали, что прогестагены оказывают различное влияние на ферменты, участвующие в метаболизме эстрогенов в раковых клетках молочной железы в зависимости от их характеристик и режима терапии. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы прояснить, действительно ли дроксипрогестерона ацетат, широко используемый в препаратах для ЗГТ, способствует повышению риска развития рака молочных желез по сравнению с другими прогестагенами.